对刺梨黄酮含量及其抑菌活性的影响分析材料与方法

　　1 材料与方法。

　　1.1 材料与仪器。

　　1.1.1 材料。

　　刺梨果实来自贵州省遵义市；大肠杆菌（Esche-richia Coli）（ATCC 25322）、金黄色葡萄球菌（Staphylo－coccus aureus）（ATCC25923）购买自中国微生物菌种网；芦丁购自国家标准物质网；其他试剂均为普通分析纯。

　　1.1.2 仪器。

　　ME-204 电子天平：梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司；BCD-236SDCN 电冰箱：青岛海尔股份有限公司；101-AS 鼓风干燥箱：北京科伟永兴仪器有限公司；LGJ-10 冷冻干燥机：北京松源华兴科技发展有限公司；FW80 高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；752N 紫外可见分光光度计：上海精科实业有限公司；GHP-9050N 隔水式恒温培养箱、THZ-100恒温培养摇床：上海一恒科学仪器有限公司；VC-S-1060 超净工作台：北京东伟众强环境科技有限公司。

　　1.2 方法。

　　1.2.1 试验设计。

　　分别称取 150 g/份刺梨果鲜样，采用冷冻干燥、阴干（平摊于室内通风处）、恒温鼓风烘烤（70 ℃）3 种干燥方式干燥至样品恒重；另外在-18 ℃冰箱冷冻保存 3份，分别于保存之后第 10 天、20 天、30 天取样分析。干样采用磨粉机粉碎过三号筛备用，鲜样称重后直接用研钵磨细；每种处理 3 次重复。

　　1.2.2 测定方法。

　　1）刺梨黄酮的提取参照王振伟等 [5] 的方法，稍做修改。准确称取冷冻干燥、阴干和恒温鼓风烘烤的干样品 2.00 g、鲜样加入 4.00 g，加入 40 mL 50 %的乙醇，在 40℃、300 W 超声辅助提取 40 min，之后 6 000 r/min离心 10 min，取上清液定容至 50 mL 容量瓶中，待测。

　　标准曲线的绘制、黄酮含量测定及提取率的计算方法同王振伟等的方法 [5] 。

　　2）刺梨黄酮体外抑菌活性测定。

　　大肠杆菌和金黄色葡萄球菌采用牛肉膏蛋白胨培养基活化并扩大培养，采用平板牛津杯法进行体外黄酮抑菌活性的测定 [6-7] 。将两菌液稀释至 10 6 cfu/mL，取100 μL 均匀涂于 PCA 平板表面，再分别放置 6 只无菌干燥的牛津杯（外径为 8 mm，高 9 mm）；分别取 100 μL黄酮提取液于牛津杯中，以蒸馏水为阴性对照，青霉素（960 μg/孔）做阳性对照，于培养箱中 37 ℃培养 24 h后，分析测定抑菌圈直径（DIZ），并通过稀释刺梨黄酮提取液的方法测定其最小抑菌浓度（MIC），每组重复3 次。

　　1.3 统计分析。

　　采用 Excel 和 DPS 软件对数据进行分析。

参考文献：

　　[1] 樊卫国,夏广扎,罗应春.贵州省刺梨资源开发利用及对策[J]. 西南农业学报,1997,10(3):109-115。

　　[2] Ma Y X,Zhu Y,Wang C F,et al. The aging retarding effect of‘Long-Life CiLi’. Mech Ageing Dev[J].1997,96(1-3):171-180。

　　[3] 吴立夫,杨履端,何照范,等.刺梨汁的降血脂作用[J]. 贵州农学院学报,1992,11(1):89-93。

　　[4] 张晓玲,瞿伟菁,孙斌,等.刺梨黄酮的体外抗氧化作用[J]. 天然产物研究与开发,2005,17(4):396-400。

　　[5] 王振伟,申森,胡晓冰.刺梨中黄酮的超声提取及 HPLC 测定[J].

　　湖北农业科学,2014,53(19):4684-4687。

　　[6] Sun H Y,Li Z B,Liu W X,et al. In vitro antibacterial activities of an－tibiotics and traditional Chinese medicinal herb extracts on Es －cherichia coli and Staphylococcus aureus. Asian J Chem[J]. 2014,26(1):298-302。

　　[7] Li W B,Sun H Y,Zhou J W,et al. Antibacterial activities,antioxidantcontents and antioxidant properties of three traditional Chinesemedicinal extracts. Bangladesh J Pharmacol[J]. 2015,10(1):131-137。

　　[8] 杨江涛.刺梨多糖分离纯化、理化性质及生物活性研究[D]. 贵州:贵州大学,2008:11-14。

　　[9] 张晓玲.刺梨黄酮及其生物学活性研究[D]. 上海:华东师范大学。