刺梨种子的挥发性组分进行检测材料与方法

　　材料与方法BACB／C和昆明种小鼠，体重20土SD2s，雌雄各半。

　　豚鼠，体重280土SD2s，雄雄各半。刺梨多糖(PolysaccaridcsofRosaFOX-burghiiTratt，PRRT)系刺梨果实原汁中提取的微黄色干粉(医科院贵州微量元素研究所提供)，临用前用生理盐水配制成2的溶液溶菌酶纯品(上海禽蛋二厂产品)。补体即新鲜豚鼠混合血清，经SRBC(10：1)于4。

　　C吸收30min后配成所需浓度。溶血素(兔抗SRIK2抗体)自制，实验时采用其溶血亚单位(1：9000)。巨噬细胞吞噬功能实验BALB／C和昆明种小鼠各2只。2．0PRRTd00ms／(ksd)ip(以下各小鼠实验组PRRT用量均同)，连续注射5d，对照组用生理盐水(Ns)。

　　末次注射后6h，基础肉汤培养基lm]／只ip，23h后ip2鸡红细胞悬液o．5ml／只，d0rain后处死小鼠，腹腔液涂片，瑞氏染色，镜检计吞噬百分率和吞噬指数。溶菌酶含量测定BALB／C和昆明种小鼠各24只。ipPRRT×5d，对照组'p等量NS，d6摘除眼球放血，分离血清。用PBS稀释血清(1：2)，采用琼脂平板打孔测定法一进行实验。

　　同时配制不同浓度的溶菌酶纯品标准液(100峙／巾l，500ps／mm，250．s／mi，】25gs／mI，62．5．g／m1)，以其浓度为对数纵座标、溶菌环直径为横座标绘制标准曲线，从曲线上查出每毫升检品所含溶菌酶的g数。豚鼠血清总补体活性测定豚鼠20只．ipPRRT40ms／(ks·d)×6d，对照组ipNS．d7心脏穿刺取血，分离血清，采用CHso测定总补体活性口]。脾细胞玫瑰花结试验：BALB／C和昆明种小鼠各24只，PRRT用量方案同溶菌酶含量测定试验。

　　取脾脏制备细胞悬激进行EAC玫瑰花结试验。最后统计EAC玫瑰花结形成细胞(EACrosette—forminscell，EAC一RFC)的阳性百分率。脾细胞溶血空斑试验口BALB／C的和昆明种小鼠各2d只，ipPRRT或NS一次，次日ip20绵羊红细胞(sheepredbloodcell，SRBC)0．4ml／只免疫小鼠，再ipPRRT5d，d6进行脾细胞溶血空斑试验，计l0脾细胞中的空斑形成细胞(plaqueformingcell，PFC)数。

　　脾细胞分泌的溶血素测定利用溶血空斑实验组脾细胞悬液，采用定量溶血分光光度法(quantitativehemolysinspcctroph。-tometry，QHS)测定睥细胞产生和分泌的抗体(溶血素)溶解SRBC而释放的Hb相对含量。若Hb相对含量越高，脾细胞分泌的溶血素也就越多。血凝素抗体澳l定进行溶血空斑试验前，分离动物血清，测定血凝素抗体滴度。

　　睥细胞E玫瑰花结试验利用EAC花结实验组动物脾细胞悬液同时进行E玫瑰花结试验。酸性萘乙酸醅酶活性检测E玫瑰花结试验前，取尾血制备血薄膜涂片进行酸性Ⅱ一萘乙酸酯酶(ac_d—q—naphthylacetate~s-terase，ANAE)染色，计算ANAE阳性百分率。小鼠足垫迟发型变态反应BALB／C小鼠28只，SRBCIo'／dO右后足垫sc致敏，dl—d5jp剌梨多糖或生理盐水，末次注射后4hSRBC108／40pl左后足垫sc攻击，24h用游标卡尺测足垫周长，并计算其肿胀率。周长=(厚+宽)×2。

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